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 　　近年來(lái)，酶標(biāo)儀在臨床實(shí)驗(yàn)室中的應(yīng)用越來(lái)越普及，使得酶免疫分析法(EIA)的自動(dòng)化程度及精確性愈來(lái)愈高，尤其是近幾年，進(jìn)口的、國(guó)產(chǎn)的單、多通道全自動(dòng)酶標(biāo)儀的種類及型號(hào)發(fā)展非常迅猛，是臨床實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化程度繼生化分析儀、血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、血凝儀等之后的又一次更新和提高。然而，國(guó)內(nèi)外有關(guān)酶標(biāo)儀性能系統(tǒng)評(píng)價(jià)的方法甚少，有的評(píng)價(jià)指標(biāo)簡(jiǎn)單且不全面，有的對(duì)其性能評(píng)價(jià)所采用的方法不盡一致，導(dǎo)致不同儀器之間、廠家與用戶之間、用戶與用戶之間的評(píng)價(jià)指標(biāo)缺乏可比性，這是由于酶標(biāo)儀在制造工藝(多通道檢測(cè)器)、測(cè)定原理(垂直光路光度測(cè)定法)與其它水平光路光度測(cè)定的儀器(721分光光度計(jì))之間存在著很大的差別。因此，我們對(duì)國(guó)內(nèi)外幾個(gè)不同廠家和型號(hào)的儀器經(jīng)過(guò)系統(tǒng)研究論證，初步建立了一套較為完善的酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)指標(biāo)與鑒定的基本方法。經(jīng)初步應(yīng)用，效果滿意，應(yīng)廣大讀者和用戶的要求，擬將酶標(biāo)儀性能評(píng)價(jià)與鑒定方法的理論及其原理作一介紹和補(bǔ)充，以供同行在評(píng)價(jià)、鑒定和使用儀器時(shí)參考，從而為進(jìn)一步提高檢測(cè)結(jié)果的室內(nèi)重復(fù)性和室間可比性提供可靠的保證。

　　方法:

　　一.濾光片波長(zhǎng)精度檢查及其峰值測(cè)定

　　方法及其衡量的標(biāo)準(zhǔn)：用高精度紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(波長(zhǎng)精度±0.3nm)對(duì)不同波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行光譜掃描，檢測(cè)值與標(biāo)定值之差即為濾光片波長(zhǎng)精度，其差值越接近于零且峰值越大表示濾光片的質(zhì)量越好，波長(zhǎng)精度越高。

　　二.靈敏度和準(zhǔn)確度的監(jiān)測(cè)

　　方法：①靈敏度：精確配制6ug/ml重鉻酸鉀(干燥)溶液(0.05mo1/L硫酸溶解)，加入200ul重鉻酸鉀溶液于小孔杯中，以0.05mo1/L硫酸溶液作空白，于450nm(參比波長(zhǎng)650nm)測(cè)定，其吸光度應(yīng)≥0.01A。②準(zhǔn)確度：準(zhǔn)確配制：1mmo/L對(duì)硝基苯酚(提純品)水溶液，然后以10mmo1/L氫氧化鈉溶液25倍稀釋之，加入200ul稀釋液于小孔杯中，以10mmo1/LNaOH溶液作空白，于405nm(參比波長(zhǎng)650nm)檢測(cè)，其吸光度應(yīng)在0.4A(0.395～0.408A)左右。

　　三.通道差與孔間差檢測(cè)

　　方法及其表達(dá)方式：①通道差檢測(cè)：取一只酶標(biāo)板小孔杯(杯底須光滑、透明、無(wú)劃痕、無(wú)污染)以酶標(biāo)板架作載體，分別加入三種不同濃度的甲基橙溶液200u*后置于8個(gè)通道的相應(yīng)位置，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)(測(cè)定波長(zhǎng)490nm，參比波長(zhǎng)630或650nm，以下均相同)連續(xù)測(cè)三次，觀察其不同通道之間測(cè)量結(jié)果的一致性可用極差值來(lái)表示其通道差。②孔間差的測(cè)量：選擇同一廠家、同一批號(hào)酶標(biāo)板條(8條共96孔)分別加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065～0.070A)先后置于同一通道，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)檢測(cè)，其誤差大小用±1.96s衡量。

　　四.零點(diǎn)飄移

　　方法：取八只小孔杯，分別置于八個(gè)通道的相應(yīng)位置，均加入200ul蒸餾水并調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)或單波長(zhǎng)(490nm)每隔30min測(cè)定一次，觀察8個(gè)通道4h內(nèi)的吸光度變化。其與零點(diǎn)的差值即為零點(diǎn)飄移。

　　五.精密度評(píng)價(jià)

　　方法及評(píng)價(jià)指標(biāo)：每個(gè)通道三只小杯，分別加入200ul高、中、低三種不同濃度的甲基橙溶液，蒸餾水調(diào)零，采用雙波長(zhǎng)作雙份平行測(cè)定，每日測(cè)定兩次，連續(xù)測(cè)定20天。分別計(jì)算其批內(nèi)精密度、日內(nèi)批間精密度、日間精密度和總精密度及相應(yīng)的CV值。

　　六.線性測(cè)定

　　方法：精確稱取甲基橙配制5個(gè)系列濃度的溶液，采用雙波長(zhǎng)平行檢測(cè)8次求其均值。計(jì)算回歸方程、相關(guān)系數(shù)r及標(biāo)準(zhǔn)估計(jì)誤差Sy,x，并用±1.96Sy,x表示樣品的95%測(cè)量范圍。

　　七.雙波長(zhǎng)評(píng)價(jià)

　　方法：在運(yùn)用酶標(biāo)儀檢測(cè)樣品時(shí)，由于溶液中的小氣泡、杯底的水紋印及劃痕、小孔杯之間透明度的差異等等，這些都是儀器測(cè)定過(guò)程中常見(jiàn)的干擾因素，而標(biāo)本中的干擾組份(如溶血、黃道)因洗滌而對(duì)測(cè)定結(jié)果影響則較小，因此我們將文獻(xiàn)中的雙被長(zhǎng)評(píng)價(jià)方法改為：取同一廠、同一批號(hào)酶標(biāo)板條(每個(gè)通道2條共24孔)每孔加入200ul甲基橙溶液(吸光度調(diào)0.065～0.070A)先后于8個(gè)通道分別采用單波長(zhǎng)(490nm)和雙波長(zhǎng)(測(cè)定波長(zhǎng)490nm、參比波長(zhǎng)630/650nm)進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)測(cè)定結(jié)果的均值、離散度，比較各組之間是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異以考察雙波長(zhǎng)清除干擾因素的效果。